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關鍵詞 注射用阿昔洛韋；細菌內毒素；干擾試驗 Test of Bacterial Endotoxin on Aciclovir For Injection Zhang QiuYue，Zhang Ye Henan Proaincial Hospital Anyang,Henan,455000,China Abstract Objectives To establish a method for test of bacterial endotoxin on aciclovir for injection.Methods By interfere test,to study the inhibitive action of Aciclovir For Injection in bacterial endotoxins test. Results The injection did not interfere with tachypleus amebocyte lysate in the concentration diluted to 0.8 mg?ml-1. Conclusion Bacterial Endotoxin test (gel-clot method) can be used as an alternative method for the rabbit pyrogen test for Aciclovir For Injection 《中國藥典》2005年版規定的方法為熱原檢查法。細菌內毒素檢查法為替代熱原檢查法的一種檢測方法，目前已被各國藥典所采用。為此，參照《中國藥典》2005年版細菌內毒素檢查法［１］，考察了注射用阿昔洛韋對細菌內毒素檢查的干擾情況，為其建立細菌內毒素檢查法提供實驗依據。 1 實驗材料 ZH-2型旋渦混合器（天津藥典標準儀器廠）；DS1型恒溫水浴箱（北京市醫療設備總廠）；細菌內毒素標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號20030829，每支8EU）；細菌內毒素檢查用水（海洋生物制品廠，批號20031020，每支2ml）；鱟試劑（海洋生物制品廠，批號20040109，靈敏度0.25 EU?ml-1；湛江安度斯生物有限公司，批號20030824靈敏度0.25 EU?ml-1）；注射用阿昔洛韋（武漢生物化學制藥公司，批號0408032、040911；武漢普生藥業公司，批號041201） 2 實驗方法與結果 2.1 細菌內毒素限值（L）的確定 根據公式L=K?M-1，式中L為細菌內毒素限值；K為按規定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時最大可接受的內毒素劑量，注射劑為5EU?Kg-1?h-1、；M為本品每小時人用最大劑量，即M=15 mg?Kg-1、?h-1；計算L=5／15=0.3EU?mg-1。 2.2 鱟試劑靈敏度復核 用細菌內毒素檢查用水將內毒素工作標準品稀釋成0.5、0.25、0.125、0.06 EU?ml-1的系列濃度，每一濃度取0.1ml，加入已有0.1ml鱟試劑溶液的試管中，每一濃度平行做4管，同時做陰性對照，輕輕混勻，置37±1℃水浴中，保溫1h，結果見表1。 2.3 干擾試驗預試驗 將供試品用細菌內毒素檢查用水依次稀釋成1.6、0.8、0.4、0.2mg?ml-1系列溶液，記為NPC，另制備一同樣濃度系列的樣品溶液，但在制備過程中加入含2λ濃度的內毒素工作標準品，記此系列為PPC，取不同廠家鱟試劑，分別與上述NPC和PPC進行反應，其中NPC出現陽性或PPC出現陰性則表示有干擾影響，結果見表2。 表2結果表明，注射用阿昔洛韋對鱟試劑與內毒素反應，在0.8mg?ml-1時，無干擾作用。用兩個廠家的鱟試劑對3批樣品檢測結果一致。 表1 鱟試劑靈敏度復核試驗結果（略） 表2 預干擾試驗測定結果（略） 2.4 供試品干擾試驗 將3批樣品用細菌內毒素檢查用水分別稀釋成最終濃度為0.8 mg?ml-1溶液。用細菌內毒素檢查用水和樣品稀釋液分別將內毒素工作標準品配制成濃度為0.5、0.25、0.125、0.06EU?ml-1的溶液，用2批不同廠家的鱟試劑進行試驗，并同時做陰性對照（NC）和供試品對照（TC）各2管，試驗結果按公式Es=lg-1(∑Xs／4)和Et=lg-1(∑Xt／4)計算。其中Xs和Xt分別為細菌內毒素檢查用水和樣品系列各反應終點細菌內毒素濃度的對數值（lg），結果見表3。表3結果表明，Es在0.5λ～2.0λ之間，且Et也均在0.5Es～2.0 Es之間，說明樣品在本實驗條件下，對不同廠家生產的鱟試劑與細菌內毒素反應無干擾抑制作用。 表3 干擾試驗結果（略） 表4 注射用阿昔洛韋細菌內毒素檢測結果（略） 2.5 樣品的細菌內毒素檢測 將供試品稀釋成0.8 mg?ml-1的溶液，用0.25 EU?ml-1的鱟試劑檢測，同時做陰性對照、陽性對照及供試品陽性對照（PPC），結果見表4。 3 討論 注射用阿昔洛韋的細菌內毒素限值（L）定為0.3 EU?mg-1是較為合理的，和熱原檢查控制量相一致，能保證臨床用藥安全。 注射用阿昔洛韋在進行細菌內毒素檢查時，當其終濃度在1.6 mg?ml-1以上時，有干擾抑制作用，當其終濃度在0.8mg?ml-1及以下時，此干擾作用可排除。 注射用阿昔洛韋在進行細菌內毒素檢查時，鱟試劑靈敏度至少應在0.25 EU?ml-1 ，用靈敏度更高的鱟試劑，對供試品做更大倍數的稀釋，則效果更好。 參考文獻 ［1］ 中華人民共和國藥典委員會. 中國藥典.二部［S］. 2005.北京：化學工業出版社，附錄85 (編輯 張 達) 作者單位：455000 河南省安陽市眼科醫院 455000 河南省安陽市食品藥品檢驗所 |
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