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作者：王 濤 來源：醫(yī)學期刊 / 醫(yī)藥科學綜合收藏本文章 【關(guān)鍵詞】 鱟試劑
鱟試劑(TAL)能與細菌內(nèi)毒素發(fā)生非常靈敏的特異性反應，凡能影響凝膠形成的因素，將對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響，出現(xiàn)假陰性或假陽性結(jié)果。我們參照《中國藥典》2000版“細菌內(nèi)毒素檢查法”中干擾試驗的基本原理及細菌內(nèi)毒素檢測方法，對加替沙星氯化鈉注射液的細菌內(nèi)毒素檢測方法進行了研究，本文探討了用鱟試劑檢查加替沙星氯化鈉注射液中細菌內(nèi)毒素可行性。 1 實驗材料 1.1 鱟試劑(TAL) 規(guī)格：0.1ml/支，批號：20040508，靈敏度：0.25Eu/ml，廈門鱟試劑廠生產(chǎn)；規(guī)格：0.1ml/支，批號：20040212，靈敏度：0.25Eu/ml，湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)。 1.2 細菌內(nèi)毒素工作標準品 批號2002-3，規(guī)格180Eu/支，中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)。 1.3 細菌內(nèi)毒素檢查用水 50ml/瓶，批號：0411160，湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)。 1.4 加替沙星氯化鈉注射液 100ml（200mg），批號03031741，03050841，03071941，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，熱原檢查合格。 1.5 玻璃儀器 1ml注射器等，臨用前250℃干烤2h備用；ZH－2型自動旋渦混合器。 2 方法與結(jié)果 2.1 細菌內(nèi)毒素限值計算 按部頒標準WS-146(X-131)-93(2)，本品熱原檢查注射劑量D＝3ml/kg。據(jù)《中國藥典》2000年版，細菌內(nèi)毒素對家兔致熱閾改為K＝5Eu/kg，本品細菌內(nèi)毒素理論限值L 2.2 本品最大有效稀釋倍數(shù)MVD MVD=L/λb≈6即為1：6倍。 2.3 TAL靈敏度的復核 根據(jù)所用TAL靈敏度標示值λ＝0.25Eu/ml，用細菌內(nèi)毒素檢查用水將細菌內(nèi)毒素滲解，在旋渦混合器上混勻（15min），并按1：2等比稀釋法將細菌內(nèi)毒素稀釋成濃度為2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的系列內(nèi)毒素溶液，用檢查用水分別作二支陰性對照(NC)管，按《中國藥典》2000版二部和《藥品標準操作規(guī)范》（中國藥品生物制品檢定所《中國藥品檢驗標準操作規(guī)范》2000版）進行鱟試驗操作，結(jié)果見表1。 結(jié)果經(jīng)計算表明2個批號的TAL的靈敏度測定值均在0.5λ～2.0λ之間。 2.4 干擾試驗 按TAL復核試驗項下方法，用細菌內(nèi)毒素檢查用水和未檢出內(nèi)毒素加替沙星注射液及2倍稀釋液將細菌內(nèi)毒素工作標準品進行稀釋，使其最終內(nèi)毒素濃度分別為2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ稀釋系列，分別各加0.1ml到已復溶的TAL反應管內(nèi)，每濃度重復四管，同時用細菌內(nèi)毒素檢查用水做2支陰性對照管（NC）,以上各管置37℃水浴反應1h，觀察結(jié)果。見表2。表1 鱟試劑靈敏度復檢試驗結(jié)果表2 加替沙星注射液細菌內(nèi)毒素的干擾試驗結(jié)果結(jié)果表明加替沙星氯化鈉注射液（批號03031741）1個1：2稀釋后對細菌內(nèi)毒素檢查法無干擾作用。另取批號（ 03050841，03071941）加替沙星氯化鈉注射液同法試驗，所得結(jié)果相同。證明本品可用細菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法。 3 討論 不同批號的細菌內(nèi)毒素檢查和供試品家兔法熱原對照試驗表明加替沙星注射液對TAL無干擾作用。家兔熱原實驗法，它反映了熱原引起哺乳動物復雜的體溫升高反應過程。但家兔熱原實驗法中，家兔的來源、品種以及其嚴格的飼養(yǎng)條件、實驗操作要求，特別是某些抗生素、血液制品、生物制品存在影響家兔正常體溫的問題。并且家兔熱原實驗法本身就是一種限度試驗，不能定量，無法標準化，靈敏度和重復性差。其局限性日益被人們所認識。而細菌內(nèi)毒素檢查法具有快速、準確、經(jīng)濟、操作簡便等優(yōu)點，因此用它取代家兔法對加替沙星注射液進行熱原檢查是可行的。 作者單位：430071 湖北武漢，武漢大學中南醫(yī)院 |
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