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生物知識

elisa檢測標本處理

作者:admin 來源:本站 發布時間: 2010-12-21 22:10  瀏覽次數:
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• 注意事項:

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在 4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在 -20 ℃或-70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃ 可保存48 小時, -20℃ 可保存1 個月。 -70度可保存 6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

• 液體類標本:

標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿。每個標本量收集體積= 100ul ×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

• 血清:

室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 /分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

◇血漿:

應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v)抗凝劑 (0.1M 檸檬酸鈉或 1%heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 /分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。

◇尿液、胸腹水、腦脊液:

用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 /分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

◇細胞培養上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 /分)。仔細收集上清。檢測細胞內的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 /分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

◇組織標本:

切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS ,緩沖液中可加入 1 μg/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 /分)。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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