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LONZA鱟試劑資料

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Lonza內毒素檢測試劑產品目錄

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【摘要】  鱟試驗因其簡單﹑快速﹑靈敏﹑準確的特點，被世界各國廣泛采用，中國藥典和歐美藥典將其定為法定的細菌內毒素檢查法，大范圍地替代了熱源檢查法。為了確保其檢查結果的準確性，本文對鱟試劑的使用進行了探討，以規范鱟試劑的正確使用。

【關鍵詞】  鱟試劑;細菌內毒素檢查法

　【Abstract】 TAL reagent test because of its simple, fast and accurate characteristics was widely adopted around the world. Chinese Pharmacopoeia, European and the United States Pharmacopoeia set it as the statutory bacterial endotoxins test, replaces the pyrogen test on a large scale. In order to ensure the accuracy of test results, the main discussion of this paper is the use of tachypleus tridentatus leach(TAL),to regulate the proper use of TAL.

　　【Key words】 TAL;bacterial endotoxins test

　　1 鱟試劑的分類

　　鱟試劑是從棲生于海洋的節肢動物“鱟”的藍色血液中提取變形細胞溶解物，經低溫冷凍干燥而成的生物試劑，專用于細菌內毒素檢測。

　　1.1 按原料來源分 一種是由美洲鱟血液提取的稱美洲鱟試劑(Limulus Amebocyte Lysate)，縮寫為LAL，由美國生產;另一種是由東方鱟血液中提取的稱東方鱟鱟試劑(Tachypleus Amebocyte Lysate)，縮寫為TAL。TAL與LAL有相同的功效。

　　1.2 按實驗方法分 細菌內毒素檢查法包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者又包括濁度法和顯色基質法[1]。則鱟試劑可分為：凝膠法鱟試劑、動態濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑。

　　凝膠法鱟試劑通過與內毒素產生凝集反應的原理來定性檢測或半定量內毒素的方法。

　　動態濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑則都是定量檢測內毒素的。

　　1.3 按使用特點分

　　1.3.1 普通鱟試劑 靈敏度0.5～0.125EU/ml，適用于僅需要檢測內毒素限量的樣品。

　　1.3.2 高靈敏度鱟試劑 靈敏度0.06～0.015 EU/ml，適用于內毒素限量較低的樣品細菌內毒素檢查。

　　1.3.3 特異性鱟試劑 靈敏度0.5～0.015EU/ml，適用于成分較為復雜，會對鱟試劑產生干擾的樣品[2]。

　　1.3.4 定量法鱟試劑 最低檢測限0.03～0.005 EU/ml，適用于需要對內毒素進行定量測定的樣品。

　　2 鱟試劑在細菌內毒素檢查法中的正確使用

　　內毒素檢查法結果準確與否與所用鱟試劑的靈敏度相關性很大[3]，而鱟試劑的靈敏度與它的正確使用又密切相關。所以，一定要嚴格執行鱟試劑的質量標準，規范使用鱟試劑。

　　2.1 保證所使用鱟試劑的質量 鱟試劑的質量主要表現在其靈敏度、自凝時間與成膠狀態三個方面：靈敏度穩定;自凝時間不低于24h[4];具有一定的緩沖能力與合適的pH;反應后即形成堅實凝膠，將成膠安瓿翻轉180°而不會被破壞。而質量稍差的鱟試劑存放一定時間后(如半年)其靈敏度可能發生變化，而靈敏度的改變會使測定結果所反映的供試品中內毒素的允許限值發生變化[5]。因此，需選擇具有國家頒發的批準文號,質量穩定的鱟試劑。

　　2.2 對鱟試劑靈敏度進行監測性復核 由于不同廠家鱟試劑質量不盡相同，即便是相同廠家不同批號的鱟試劑也有差異,這便導致鱟試劑靈敏度復核值與標示值不盡一致，因此鱟試劑的復核值對檢測結果有顯著影響[6]。每使用新批號鱟試劑時應復核其靈敏度;對留樣鱟試劑自生產之日起，每6個月進行一次靈敏度檢測，其靈敏度在有效期內應符合規定。有研究表明，鱟試劑的靈敏度在符合標準規定及適當的貯存條件下,3年內其靈敏度變化不大，是穩定的。建議可適當延長其有效期[7,8]。因此，對鱟試劑靈敏度進行監測性復核有利于確保實驗的準確性，同時可以最大程度地使用鱟試劑。

　　2.3 使用過程正確操作 選擇合適的操作方法與順序，在鱟試劑的使用過程中尤為重要。在操作過程中要注意以下幾點：(1)實驗室要求潔凈、無塵埃流通;檢驗人員同時注意衛生的保持。在整個使用操作過程中應防止微生物的污染，例如空氣的流動，人員的口沫、汗液污染等。(2)鱟試劑開啟、溶解和配制時應盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中，避免鱟試劑外損。(3)鱟試劑中含有多種蛋白質，用力振搖會產生氣泡，一旦起泡難以消除，而影響檢測的準確性，所以在整個操作過程中都要輕力以避免因過分震動而引起的誤差。(4)量取和加樣反應物時，一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。(5)生成凝膠的最適pH值為6～8，對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液(5%,10%)等注射液，不需考慮供試液的pH值，而檢查其他制劑時，尤其是一些本身緩沖能力較強或偏酸、堿的供試品，應考慮供試品的pH值[5]。(6)使用時要嚴格控制溫度和時間。當鱟試劑一加入內毒素及樣品混合液中時反應已開始，并在一定的溫度范圍內，反應溫度越高，反應速率越大;保溫時間的增長，也會提高鱟試劑的靈敏度，增加假陽性的發生[9]，導致較大誤差。因此，要注意控制溫度的變化和保溫時間。(7)保持實驗器具的潔凈。每次檢驗完畢，應及時將玻璃器具充分清洗后于250℃干熱滅菌處理，待烤箱溫度升至設定的溫度后開始計時，干烤至少1h[10]。也可用其他經確證不干擾細菌內毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h，用無熱原水沖洗，70℃干燥備用。

　　2.4 鱟試劑的貯存 雖然凍干的鱟試劑在常溫條件下是相對穩定的，但還是應存放在2℃～8℃下，避免長時間放置在高于25℃的溫度條件下導致因貯藏不當、質量下降而引起的檢驗誤差。

　　3 建議

　　3.1 一般中草藥注射液由于成分復雜，以及含糖注射液中常含有β-葡聚糖[11]，使其干擾因素較多。而使用特異性鱟試劑，可利用其能夠屏蔽β-葡聚糖引起的鱟試劑凝聚反應，僅與內毒素反應的原理，以消除干擾[12～14]，從而減少或消除假陽性反應[15]。

　　3.2 當夏天室溫較高時，控制鱟試劑使用過程中溫度的變化，可通過在冰水浴中進行加樣以取得較好效果;同時，實驗操作從鱟試劑的復溶到放入恒溫儀應盡量在1.5h內完成。

　　3.3 雖然目前的鱟試劑相對穩定很多，但還是應存放于2℃～8℃的條件下，并保持溫度的穩定，如冰箱發生故障，無法保持溫度時，就應及時更換貯存設備。

　　3.4 對于已復溶的鱟試劑在間歇使用過程中最好放置在冰冷的表面上或于2℃～8℃的冰箱內存放24h以內;亦或在復溶并凍結后將其存放在-20℃以下，可存放28天，但只能凍融一次。

【參考文獻】
  　1 國家藥典委員會.中國藥典.北京:化學工業出版社,2005,二部，附錄 85-88.

　　2 施震，尹銀嘉，李華. 特異性鱟試劑和非特異性鱟試劑對艾迪注射液中細菌內毒素檢測的比較. 中國生化藥物雜志，2003，24(3)：137-138.

　　3 梁蘋，蔡紅. 鱟試劑靈敏度對細菌內毒素限量檢查的影響. 華西藥學雜志，1999，14(3)：204-204.

　　4 衛生部. 部標準《鱟試劑》 修訂稿. WS1-364(B-123)-91.

　　5 張紅霞, 陳慧, 馬金剛. 影響鱟試劑靈敏度測定結果因素的分析. 中國藥師，2007，10(8)：825-826.

　　6 程義琳，吳蕙玲. 鱟試劑靈敏度對檢測結果的影響. 中國藥師，2005，8(4)：344-345.

　　7 陳引秀. 鱟試劑靈敏度穩定性的考察. 海峽藥學，2004，16(3)：83-84.

　　8 金華. 鱟試劑靈敏度穩定性觀察. 醫學理論與實踐，2004，17(1)：84-84.

　　9 黃冬，房判石.鱟試劑法檢測細菌內毒素假陽性原因淺析. 首都醫藥，2002，9(5)：53-54.

　　10 中國藥品生物制品檢定所. 中國藥品檢驗標準操作規范. 北京：中國醫藥科技.

　　11 葉良君，張強，張濤，等.β-葡聚糖對含糖大輸液細菌內毒素檢查的影響.中國藥業，2008，17(19)：24-25.

　　12 黃東燕. 特異性鱟試劑檢測當歸注射液細菌內毒素. 中成藥，2000，22(8)：541-543.

　　13 張貴寶，徐紫娟，白文東. 鱟試劑用于20%甘露醇注射液細菌內毒素檢測. 工企醫刊，2007，20(6)：18-20.

　　14 尹銀嘉，商小曼. 特異性鱟試劑檢測人參多糖注射液中的細菌內毒素. 中國醫院藥學雜志，2002，22(11)：677-679.

　　15 唐坤.棄G因子鱟試劑檢測在大輸液中應用. 華夏醫學，2000，13(2)：219-221.

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