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生物知識

試劑盒提DNA的原理

作者:admin 來源:本站 發(fā)布時間: 2014-09-21 09:38  瀏覽次數(shù):
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一般提取DNA的原理基于這樣幾個步驟:1. 濃縮樣品(用詞不是很準(zhǔn)確),主要的意思就是通過離心、過濾等手段將樣品(比如土壤中的微生物、植物的根細(xì)胞等)收集到一起。2. 通過物理、化學(xué)或者兩者兼而有之的手段,破碎樣品,使目的DNA釋放出來。3. 將雜質(zhì)去除。4. 清洗DNA溶液。5. 離心沉淀DNA。

以提取土壤中樣品為例,簡要說一下。
1. 將土樣與緩沖液混合均勻,然后離心去上清,留下的沉淀再次沖洗(或者不沖洗),目的就是要初步去除土樣中的雜質(zhì)等。
2. 通過物理(比如超聲波、玻璃珠-振蕩、反復(fù)凍融)、或者化學(xué)(比如溶菌酶、表面活性劑等)等方法來破碎細(xì)胞,使目的DNA釋放到溶液中。
3. 一般采用化學(xué)試劑,來去除溶液中的雜質(zhì)蛋白等物質(zhì),抽提DNA。可反復(fù)操作,使DNA更純(但是需要注意的是,抽提次數(shù)過多,會損失DNA,具體要看自己試驗的需要)
4. 使用醇類物質(zhì),低溫下沉淀DNA(一般是放在-20℃)
5. 離心取沉淀,然后用無菌純水(或者TE緩沖液)來復(fù)溶DNA。
以上說的是不用試劑盒提取DNA的基本操作以及原理,推到試劑盒提取的上面,原理是一樣的。

 

試劑盒原理是在特定溶液環(huán)境下(高鹽、低pH)使核酸吸附在固相介質(zhì)(一般是硅膠膜)上,洗滌去除雜質(zhì)后,再改變?nèi)芤涵h(huán)境使DNA溶解到純水或TE中。
試劑盒嚴(yán)格來說也分好多種,經(jīng)典的是離心柱的,就是把硅膠膜固定在離心管中,類似于超濾膜,用離心力或者負(fù)壓讓液體通過硅膠膜,核酸就留在膜上。在經(jīng)過洗滌、洗脫的步驟得到核酸。這種方法的優(yōu)點是操作簡單、時間短,現(xiàn)在也能達(dá)到很高的質(zhì)量,價格也不貴。缺點是不易放大,需要多次離心。
基本步驟是先使樣本裂解,在特定溶液中通過離心流過硅膠膜,再經(jīng)過幾次洗滌,最后加上洗脫液,離心后核酸就溶解到洗脫液中。具體的你可以根據(jù)你自己的需要到網(wǎng)上查一下說明書,現(xiàn)在做試劑盒公司的很多,步驟大同小異。
試劑盒也不是一定很便宜,對一些難度高(病毒核酸、法醫(yī)樣本核酸)或者要求高(去內(nèi)毒素)的用途也比較貴。還有一種磁珠法提取,不需要離心,易于放大,可以用于自動化操作。
 

 

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