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Fast DNA® SPIN Kit for Soil土壤DNA快速提取試劑盒提取步驟 （沒有FastPrep®儀器的情況下） （1）稱取0.3 g~0.4 g樣品加入Lysing Matrix E Tube 中。（注意：需保證加完樣品及所需溶液后，管中應(yīng)留出不少于200 μL 空間） （2）加入978 μL SPB，加入122 μL MT Buffer。 （3）蓋緊Lysing Matrix E Tube的蓋子，將離心管置于渦旋混合儀上，對管內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行震蕩破碎均質(zhì)化，時(shí)間設(shè)定為40 s~50 s。（注意：時(shí)間不可過長，有可能打斷基因組DNA片段降低提取質(zhì)量）從各個(gè)角度都可以震蕩一下，不要光是底部。 （4）在8000 r/min轉(zhuǎn)速下離心15 min，有利于去除體積較大或具有復(fù)雜細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的樣品碎屑。 （5）將上清液用大口槍頭吸出轉(zhuǎn)入1.5 mL的微離心管中，加入250 μL PPS，手持離心管晃動(dòng)10次以混勻。 （6）在8000 r/min下離心5 min，用大口槍頭將上清液轉(zhuǎn)移至5 mL離心管中。 （7）搖勻Binding Matrix后，吸取1.0 mL加入上一步離心管中。 （8）將離心管上下顛倒2 min后，靜置3 min，使DNA附著于Bingding Matrix上，并等待二氧化硅基質(zhì)沉淀。（這一步根據(jù)沉淀情況時(shí)間可以適當(dāng)延長） （9）小心移除600 μL上清液，避免吸出沉淀物。 （10）將剩余的上清液與沉淀物重新混勻，吸取約600 μL混合液移入SPIN Filter中，8000 r/min下離心1 min。 （11）倒掉收集管中的液體，重復(fù)上一步操作直至5 mL離心管中的液體吸盡。 （12）加入已制備好的SEWS-M溶液500 μL，用小槍頭小心混勻后，8000 r/min下離心1 min后，棄去收集管中的液體。 （13）為更好的去除雜離子，重復(fù)第12步，更換為1.5 mL離心管。 （14）在8000 r/min下離心2 min，去除殘留的SEWS-M溶液，然后更換為干凈的1.5 mL離心管。（若發(fā)現(xiàn)殘余溶液較多，可重復(fù)此步驟） （15）在室溫下，將SPIN Filter風(fēng)干5 min。（時(shí)間可以更久一些） （16）往SPIN Filter加入80 μL DES溶液，用小槍頭小心使之與Binding Matrix 混勻，65℃水浴15 min（有利于DNA的溶出）。8000 r/min下離心2 min，可得到約50 μL的DNA溶液。再加入80 μL DES溶液重復(fù)第16步操作，一共可得到約100 μL的DNA溶液。 （17）棄去SPIN Filter，將提取好的DNA存于-20℃冰箱保存。
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