快速操作指南
注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項
1.使用前檢查 Pre-Wash Buffer及Lysis Buffer F1 是否有沉淀，若有請在55 ?C加熱至完全溶解后使用。
2.Binding Buffer FS 使用前加入35 mL異丙醇（試用裝加3.5 mL），并在標簽上做標記。
3.Wash Buffer FS1 使用前加入21 mL乙醇（試用裝加2.1 mL），并在標簽上做標記。
4.Wash Buffer FS2 使用前加入50mL乙醇（試用裝加5.0 mL），并在標簽上做標記。
5.準備100個2.0 mL離心管（試用裝準備10個2.0 mL離心管）。
6.如果沒有Fastprep儀器，可使用渦旋震蕩儀（推薦搭配相應適配器），以最大速度渦旋10 min來裂解樣本。
7.14000 x g是推薦的離心速度，若離心機達不到可采用其最大速度離心。
裂解：
1 向Lysing Matrix E中加入30-200 mg糞便樣本。
可選步驟：對雜質含量高的糞便樣本可增加預洗步驟，向樣本中添加1mL Pre-Wash Buffer， 以最大速度渦旋混勻40 s，14,000 x g離心5分鐘，棄上清留沉淀。
2 向糞便樣本或者預洗過的沉淀中加入980 µL Lysis Buffer F1，120 µL Lysis Buffer F2和 10 µL RNase A Solution，渦旋混勻10 s。
3 使用FastPrep樣品制備儀，5.0 m/s 研磨40 s，或采用渦旋震蕩儀最大速度研磨10 min。
備注：以上研磨條件適合于大多數樣本，但個別樣本需要的研磨速度和時間需要嘗試后確定。
4 14,000 x g，離心5 min。
去雜：
5 小心地吸取上清液（約800 µL）轉移至新的2.0 mL離心管（自備）。
6 向離心管中加入250 µL Inhibitor Removal FS ，顛倒混合10次。
7 1,4000 x g，離心5 min。
結合：
8 小心地吸取上清液900 μL，轉移至新的2.0 mL離心管（自備）。
9 向離心管中加入900 µL Binding Buffer FS ，渦旋混勻。
10 將結合柱Column F1 裝入配套的2.0 mL收集管，向Column F1中加入800 µL 上述混合液。1,4000 x g，離心30 s，倒掉收集管中液體，再次安裝好收集管。重復一次本步驟。
漂洗：
11 向Column F1中加入500 µL Wash Buffer FS1，1,4000 x g，離心30 s，倒掉收集管中液體，再次安裝好收集管。
12 向Column F1中加入500 µL Wash Buffer FS2，1,4000 x g，離心30 s，倒掉收集管中液體，再次安裝好收集管，重復本步驟一次。
13 不加任何試劑，1,4000 x g，離心2 min。
干燥：
14 將丟棄2.0 mL收集管，將Column F1裝入配套的1.5 mL收集管。
15 將Column F1在室溫條件干燥5 min。
16 DES Buffer 提前置于 55 ?C 預熱。
洗脫：
17 向Column F1柱膜中央加入100 µL 55℃預熱的DES Buffer，1,4000 x g，離心1 min。
18 1.5 mL收集管中液體即為洗脫DNA，可應用于下游實驗，長期保存請置于-20?C ， 避免反復凍融。
FastPrep® 樣品制備家族:為您的樣品制備工作提供完美的解決方案
北京畢特博生物技術有限責任公司
http://m.pyjb.com.cn
400熱線：400-833-9299
電話：010-82015225
傳真：010-62015131
聯系人：張鈺
手機：13366202681
QQ：1050524889
|
